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ブロット法の余談

まず始めにサザン(人名)によって、「サザンブロット法」が開発された。その後、タンパク質、免疫等のブロット法が開発され、サザンにかけてノザン、ウェスタンと名前をつけていった。ちなみに、イースタンだけない(この先できるかも?)。...

サウスウェスタンブロット法

DNAプローブでタンパク質を検出する方法。電気泳動ゲル中、あるいは発現ライブラリー中に存在するDNA結合性タンパク質を検出するのに用いる。メンブランフィルターに転移させたタンパク質をそのまま、あるいは塩酸グアニジンで変性後再生させ、標識DNAプローブを用いて検出する。DNA結合性因子のクローニングに用いる。...

ウェスタンブロット法

免疫ブロット法、イムノブロット法ともいう。電気泳動で分離したタンパク質を疎水性の膜に固定し、抗原に特異的な抗体を用いて目的のタンパク質を検出する方法。具体的には、まずポリアクリルアミドゲル電気泳動を行って試料のタンパク質を分離し、これをニトロセルロース膜に電気的にブロッティングする。膜への抗体の非特異的結合を防ぐためにスキムミルクなどでブロッティングを行った後、目的とするタンパク質に対する抗体(一...

ノザンブロット法

細胞中で発現している遺伝子転写産物(mRNA)のサイズや存在量を解析する方法。細胞から抽出した全RNAもしくはmRNAを変性アガロースゲル電気泳動後、ナイロン膜やニトロセルロース膜などに写しとり、膜上で固定する。この操作までをノザンブロッティングといい、この後この膜を用い、目的の遺伝子プローブとのハイブリダイゼーションを行うことで、遺伝子のmRNAサイズ、存在量の解析を行う。...

サザンブロット法

特定の遺伝子またはDNA断片をフィルター上に検出する方法。試料DNA内にプローブDNAと相同な配列があるのか、あれば制限酵素で切断された長さがいくらあるのかを決定できる。具体的には、DNAを制限酵素で切断し、アガロースゲル電気泳動法でサイズに従い分画する。ゲル内のDNA断片をそのままフィルター上に写し(この操作をブロッティングという)、標識したプローブとハイブリダイズさせて検出する方法。...

制限酵素

二本鎖DNAの3~8ヌクレオチドからなる特異的配列を識別し、二本鎖DNAを切断するエンドヌクレアーゼの総称。酵素活性に必要な因子の要求性と切断様式の違いから、Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型に分類される。細菌類に広く分布しており、酵素の種類や認識配列菌種によって異なるので、種類は多い。Ⅰ型酵素はMg2+、S-アデノシルメチオニン、ATPを必要とし、認識塩基配列と切断点との位置関係が一定していない。Ⅱ型制限酵素は単一のサブユニットで構成...

エンドヌクレアーゼ

鎖状分子の途中のヌクレオチド間の結合を加水分解する酵素。...

エキソヌクレアーゼ

直鎖状の核酸(ポリヌクレオチド)分子の末端のヌクレオチドから順に加水分解を行う酵素。...

キャピラリー電気泳動

キャピラリー内部の狭い円筒状空間中の水溶液・ゲルを媒体として行う電気泳動。ゲル電気泳動より高い電位勾配で短時間に分析できる。一方の端近くに狭い窓を設けて吸光または蛍光法によって検出する。低分子量試料にも適用できる。...

nested PCR

確実に目的とするDNAのみを増幅するために、一度増幅したDNAをその内側にある塩基配列を元に合成したプライマーを用いて、もう一度増幅する方法。...

RT-PCR

逆転写PCR。mRNAに対してPCRを適用するための変法。PCRにおいてTaqDNAポリメラーゼはRNAには作用しないので、RNA鎖のPCRを行うにはまずcDNAを作製する必要がある(逆転写酵素とオリゴ(dT)プライマーを用いて逆転写反応をPCRの前段階として行う)。RT-PCRは遺伝子発現(mRNAが発現しているか)の検索に用いられる。またmRNAの定量も可能。定量したmRNAのcDNAをベクターに組み込んでおき、T7RNAポリメラーゼを用いてRNA化して濃度...

アガロースゲル電気泳動

アガロースゲル電気泳動は、切ったり増やしたりしたDNAを長さで分ける実験。具体的には、板状の寒天(アガロースゲル)の溝にDNAと目安のための色素(ダイ)を一緒に入れ、別の溝には指標となるいろんな長さのDNAが入っている試薬(マーカー)と色素を入れる。これを、バッファー(緩衝液)の入った泳動槽に入れ、電気をかけると、短いDNA断片が早く流れていき、長いDNA断片は遅く流れる。これでDNAを長さで分けることができる。泳...

PCR

ポリメラーゼ連鎖反応。二つのプライマーで挟まれたDNA部分を試験管内で大量に増幅させることができる革命的な方法。DNA合成酵素(DNAポリメラーゼ)はDNAの合成の際プライマーを必要とし、このプライマーから5'→3'の方向へDNAを合成していく。これを利用して①DNAの1本鎖への変性(ディネーチャー)②プライマーの結合③DNAポリメラーゼによる相補性DNAの合成というサイクルを繰り返すことにより、目的とする遺伝子領域だけを試験管...

癒されるハムスター

ハムスター脱出の瞬間の映像です。「結構頭いいな~」って感心するし、なんか笑えます。http://hapipe.blog115.fc2.com/blog-entry-280.htmlしかも楽しそうな音楽つき。笑っちゃいました。(^O^)ついでにこんなのも見つけました。食に執着するあまり、パニクッてしまったハムスター。ピアノの上っていうのもかわいいです。http://warach.blog55.fc2.com/blog-entry-2088.html...

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Author:erif355
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私の専門は生命科学なので生命科学関係が多くなると思います。
天文学も大好きですし、科学系イベントによく行くのでその辺りも書いていきたいと思います。

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